INDICES ERITROCITARIOS

INDICES ERITROCITARIOS

Los índices eritrocitarios también se denominan como índices hematimétricos o
índices corpusculares. 
Son una serie de parámetros que expresan diferentes características de los hematíes. 
Los tradicionales se calculan a partir de los valores obtenidos, previamente, del
número de hematíes (en millones por mm3), del hematócrito (en %) y de la concentración
de hemoglobina en la sangre (en g/dl). 
Los autoanalizadores hematológicos son capaces de proporcionar los índices
tradicionales, y además, suministran otros nuevos.


Índices eritrocitarios tradicionales:                                               


1.-Volumen corpuscular medio (VCM) 
Es el valor medio del volumen de los hematíes. Se calcula a partir del hematócrito (HCT) y del recuento del número de hematíes (RBC). Se utiliza la siguiente fórmula para su cálculo: 

                                                HCT

                                  VCM =  --------  x 10

                                                RBC        

Su valor normal está comprendido entre 80 y 100 µ3 (1 µ3  =  1 femtolitro  =  10-15litros). 

 Si es menor de 80 fl, se dice que hay una microcitosis, y si es mayor de 100 fl, sehabla de macrocitosis.La microcitosis se da en la ferropenia y en la talasemia, y la macrocitosis en lascarencias de B12 o ácido fólico, en las hepatopatías crónicas y en la reticulocitosis.

2.-Hemoglobina corpuscular media (HCM):

Es el valor medio del contenido en hemoglobina de los hematíes. 

Se calcula a partir de la concentración de hemoglobina (Hb) y del número de

hematíes. Se utiliza la siguiente fórmula para su cálculo: 

                                              Hb

                               HCM = --------- x 10 

                                            RBC

Su valor normal está comprendido entre 27 y 31 picogramos (1 pg = 10

-12g). Si es menor de 27 pg, se dice que hay una hipocromía, y si es mayor de 31 pg, se habla de hipercromía relativa.La hipocromía suele asociarse a la microcitosis y la hipercromía relativa a la macrocitosis.

3.-Concentración hemoglobínica corpuscular media (CHCM)

Es el valor de la cantidad de hemoglobina (en g) contenida en 1 dl de hematíes. Se calcula a partir de la concentración de hemoglobina y del hematócrito. Para sucálculo se emplea la siguiente fórmula: 

                                Hb

                CHCM=  ---------- x 100

                               HCT

Su valor normal está comprendido entre 32 y 36 g/dl. Si es mayor de 36 g/dl se

habla de hipercromía absoluta

EJEMPLO

1.      Realiza recuento de eritrocitos(RBC)

2.      Realizar determinación de hemoglobina(Hb)

3.      Realizar determinación de hematocrito (HCT)

Resultados:                                                                                                                            NORMAL

VCM

                                                 HCT                                                          46 %  X 10

                                  VCM =  --------  x 10                                VCM        -----------------   = 88.8 m³                             

                                                RBC                                                              5.18 /L 

HCM

                                                 Hb                                                                      15.28 X   10

                                 HCM = --------- x 10                                            HCM    ----------------                                 

                                                RBC                                                                          5.18/L

    CHCM                                                                                                                             =29.49pg

                                Hb                                                           15.28   X   10

                CHCM=  ---------- x 10                     CHCM      ---------------------   =       33.21 %        

                               HCT                                                               46 %

DETERMINACIÓN DE HEMATOCRITO

DETERMINACIÓN DE HEMATOCRITO

OBJETIVO

Aprender a realizar la prueba del hematocrito utilizando el macro y micrométodo, conocer su importancia en el diagnóstico de enfermedades y la forma adecuada de su procedimiento.

FUNDAMENTO

El hematocrito es un examen de sangre que mide el porcentaje del volumen de toda la sangre que está compuesta de glóbulos rojos. Esta medición depende del número de glóbulos rojos y de su tamaño. El resultado se expresa en porcentaje.

El hematocrito casi siempre se ordena como parte de un conteo sanguíneo completo (hemograma).

Para la realización de esta prueba, con el macrométodo, la sangre se extrae típicamente de una vena, por lo general de la parte interior del codo o del dorso de la mano.

Cuando se inserta la aguja para extraer la sangre, algunas personas sienten un dolor moderado, mientras que otras sólo sienten un pinchazo o sensación de picadura. Posteriormente, puede haber algo de sensación pulsátil.

Un volumen de sangre se deposita en un tubo de Wintrobe, por medio de una pipeta, hasta la marca del 10 y se debe de centrifugar. Al terminar la prueba, deben de quedar separados el plasma de la sangre y las células, depositándose en el fondo y presentando un color rojo intenso.

Para la realización del micrométodo, se utilizan unos tubos de un calibre muy delgado, llamados capilares, y pueden ser llenados con la misma sangre venosa o de capilar. Este último es el más usado, por ser más rápido y menos riesgoso al usar sangre capilar. Para su lectura se usa una escala estandarizada.

MATERIAL

v  Tubo de Wintrobe graduado de 0-100 mm

v  Pipetas Pasteur

v  Equipo para venopuncion (Tubo lila)

v  Tubos capilares azules o rojos

v  Plastilina

v  Encendedor o cerillos

v  Centrifuga

v  Microcentrifuga 

  PROCEDIMIENTO

Para macrohematocrito:

1.    Una vez seleccionada, se desinfecta la zona con alcohol al 70%, y se practica punción venosa. La sangre es recogida en un tubo lila con EDTA.

2.    Llenar el tubo de Wintrobe con la sangre extraída con anticoagulante ayudándose de una pipeta Pasteur, comenzando desde el fondo hasta la marca superior de 100 mm, teniendo cuidado de no provocar espuma ni dejar burbujas en el tubo.

3.    Se recomienda como medida de precaución tapar el tubo con un tapón de goma para evitar la evaporación.

4.    Centrifugar a 3000 rpm durante 30 minutos.

5.    Leer directamente de la graduación la columna de glóbulos rojos y anotar resultados.

Para Microhematocrito:

1.    Tomar la muestra en capilares rojos heparinizados directamente del dedo, o utilizar capilares azules sin heparina para sangre venosa con anticoagulante EDTA. Debe llenarse aproximadamente 70-80% del capilar, sin dejar burbujas de aire.

2.    Ocluir (tapar) el extremo del capilar que no estuvo en contacto con la sangre, con plastilina o sellando con fuego

3.    Colocar el capilar sobre la plataforma del cabezal de la microcentrifuga, con el extremo ocluido adherido al reborde externo de la plataforma

4.    Centrifugar por 5 minutos entre 10 000 y 12 000 rpm

5.    Para leer el resultado, se lleva a cabo una regla de tres, midiendo el volumen total de plasma y eritrocitos o por medio de la regleta.

6.    Para la regleta, se sostiene el tubo frente a la escala de manera que el fondo de la columna de eritrocitos, quede exactamente al mismo nivel de la línea hroizontal correspondiente al cero

7.    Desplazar el tubo a través de la escala hasta que la línea marcada con el 1.0 quede al nivel del tope del plasma.  El tubo debe de encontrarse completamente en posición vertical.

8.    La línea que pase al nivel del tope de la columna de eritrocitos indicara la fracción del volumen de estos.

OBSERVACIONES

Tras una centrifugación de la sangre total se pueden apreciar dos niveles, uno con el depósito de los glóbulos rojos, principalmente y en color rojo oscuro, otra capa blanca, de leucocitos y una delgada de color gris, que son plaquetas y finalmente otro nivel del plasma total, de un leve color amarillento. 

RESULTADOS

En el tubo de Wintrobe se mide directamente el nivel de la columna de glóbulos rojos, comparando el número de la lectura con los siguientes porcentajes:

Hombres: 47.0 ±5.0%

Mujeres: 42.0 ±5.0%

Niños (5 años) 38%-44%

Lactantes (3 meses): 37-42%

Recién nacidos: 50-58%

La sangre era de Edgar Osvaldo Pérez García, y el tubo de Wintrobe demostró un 49% de eritrocitos, estando en un rango normal.

En el tubo capilar, al comparar con la regleta, se obtubo un valor de 49%, al igual que el Wintrobe.

Sin embargo con los calculos matematicos hubo una pequeña diferencia.

Se considera a la medida total de eritrocitos, leucocitos y plasma en mm como un 100% y con la medida de solo los eritrocitos tambien en mm se obtiene su porcentaje con respecto a este por medio de una regla de tres:

Medida total= 58 mm (eritrocitos, leucocitos y plasma)

Medida de eritrocitos= 29 mm

58 mm -------------------------- 100%

29 mm ------------- x (hematocrito)

HEMATOCRITO: 50 %

  

DETERMINACIÓN DE LA HEMOGLOBINA

Objetivo:

Determinar cuantos gr de hemoglobina (Hb) hay en toda la sangre circulante, para tener un diagnostico clínico ya que se pueden variar diversas enfermedades debido a un valor anormal de Hemoglobina.

Fundamento:

La hemoglobina es una proteína conjugada que sirve para el transporte de oxígeno y dióxido de carbono. La masa total de eritrocitos de un adulto contiene unos 600gr. De hemoglobina capaces de transportar 800ml de oxígeno.

Una molécula de hemoglobina consta de 2 pares de cadenas polipepticas (unión de aminoácidos) (globina) y 4 grupos proteicos HEM que contienen cada uno un átomo de fe en estado ferroso. Cada punto HEM se localiza en una zona determinada de una de las cadenas de polipepticos. Localizando cerca la superficie de la molécula, el HEM se combina de forma reversible con una molécula de oxigeno y dióxido de carbono. Este grupo HEM es el responsable del del color rojo de la hemoglobina (hb).

La parte proteica o globina tiene 4 cadenas polipeptidicas que se denominan con las letras α, β, γ, δ. Existe una cadena mas la ε que esta presente durante los 3 primeros meses de vida se diferencian unas de las otras en el numero o posición (de los aminoácidos de los que están compuestas). Por lo tanto existen varios tipos de hb. en el ser humano se pueden encontrar las siguientes hemoglobinas normales:

Hemoglobina A: consat de 2 cadenas α y 2 cadenas β en un adulto normal corresponde a mas del 95% del total.

Hemoglobina A´: consat de 2 cadenas α y 2 cadenas δ en un adulto sano esta en porción menor de 3%.

Hemoglobina F (fetal): consa de 2 cadenas α y 2 cadenas γ. Es la hemoglobina principal en el feto desde el 4° mes del embarazo hasta aproximadamente los 6 meses de edad. La Hb F tiene mayor afinaidad por el oxigeno.

Hemoglobina Gower: consa de 2 cadenas α y 2 cadenas ε. Desaparece casi por completo en el tercer mes de embarazo y empieza a aparecer la Hb fetal.

Algunos datos se obtiene exmainando a simple vista una muestra de sangre. Un aspecto normal del suero o del plasma revela que el pigmento esta en los glóbulos rojos. Si se agita en una sangre total normal en el aire durante 15 min. Adquere un color rojo claro por convertir la Hb en oxihemoglobina.

La sangre tiene un color rojo cereza brillante cuando el pigmento es carboxi-hemoglobina en la intoxicación por CO. El color es chocolate en la metahemoglobulemia y la banda malvada en alsulfohemoglobulemia.

Las distintas Hb tienen espectros de absorción características a las que determina en un espectofotometro. La identificación de difrenetes formas de la Hbcon la determinación de sus espectros de absorción puede hacerse de una manera sencilla  

Material y Equipo:

·         Un colorímetro fotoeléctrico o un espectrofotómetro.

·         Una pipeta de vidrio graduada de 5 mL

·         Pipeta semiautomática

·         Tubos de ensayo.

·         Cubetas cuadradas.

·         Gradilla

·         gasa

·         Reactivos:

·         EDTA

·         Reactivo Drabkin

·         Ferrocianuro de potasio

·         Cianuro de potasio

·         Bicarbonato de potasio

·         Solución estándar de cianometahemoglobina

Reactivos biológicos:

·         Sangre venosa con EDTA.

Técnica:

1.-En un tubo de 13 x 100 colocar exactamente 5 mL de reactivo de Drabkin, marcarlo como problema (P).

2.-Obtener 5 ml de sangre venosa con anticoagulante (EDTA).

3.- Mezclar perfectamente la sangre problema, por inversión por lo menos 20 veces antes de tomar la muestra.

4.-Con una pipeta automática o pipeta de Shali se toma exactamente 0,02 mL (20 µL) de sangre total, limpiar luego la punta de la pipeta.

5.-La sangre tomada del tubo con EDTA se vierte en el tubo que contenga reactivo de Drabkin. Se enjuaga 3 veces y se mezcla.

6.- Mezcle la solución de Drabkin con la sangre por inversión y con mucha precaución (utiliza parafilm para tapar los tubos, recuerda que el reactivo tiene cianuro, el cual es un VENENO).

7.-Dejar en reposo por espacio de 3 a 5 minutos. Para que se  efectúe la reacción.

8.-Después de ese tiempo se observara una coloración roja transparente, se llena las cubetas hasta la marca que se encuentra y se procede la lectura.

9.-Leer en absorbancia con filtro verde a 540 nm llevando a cero el fotómetro con agua destilada / Drabkin.

Antes de hacer la medición con el espectrofotómetro hacer el siguiente procedimiento

PARA HACER LA MEDICION DE TRANSMITANCIA HACER EL SIGUIENTE PROCEDIMIENTO:

Medición de Transmitancia:

1.- Encender el Espectrofotómetro 30 minutos antes, después  seleccione la longitud de onda deseada (540 nm para Hb) con las teclas numéricas y oprima <GO TO>.  Aparecerá en la pantalla el valor numérico.

2.-Presine < %T> para Transmitancia. Aparecerá en la pantalla “T”.

3.-Insertemla cubeta con el blanco en el portacubeta, cierre la puerta y oprima <SECOND FUNCTION> Y <100 %>. Aparecerá En la pantalla 100.0 T.

4.-Remueva el blanco e inserte la muestra problema contenida en la celda y cierre la puerta.

 Aparecerá en la pantalla el valor en Transmitancia.

5.-Si desea imprimir, oprima <PRINT> para avance de papel y/o una segunda vez para la impresión en el papel del espectrofotómetro o <SECND REMOTE>  para mandar a un dispositivo externo (a la computadora).

6.-Retire la cubeta del compartimiento y cierre la puerta (lave la cubeta y  guárdela).

7.- para entender lo hablado ver la imagen siguiente:

8.-Si no va usar más el aparato, apáguelo y cúbralo, si desea continuar trabajando, elija el modo de trabajo siguiente y continúe.

Resultado:

Este fue el resultado que nos salió en el espectrofotómetro.

Cálculos:

.337/.340 x 15 = 14.8675

Rango:

normal ya que era la muestra de una mujer

Cálculos:

Hb total = concentración de Hb (gr/ml) x volumen sanguíneo (ml).

en espectofotometro se aplica la siguiente formula:

muestra/ estandar x 15 = Hb

Valores de referencia:

Niños al nacer…………………………….. 13,6 - 19,6 g/dL

Niños de 1 año…………………………..... 11,3 - 13,0 g/dL

Niños de 10 -12 años……………………... 11,5 - 14,8 g/dL

Mujeres……………………………………... 11,5 - 16,5 g/dL

Hombres……………………………………. 14,0 - 18,0 g/dL

Observaciones:

Al hacer la práctica notamos que para determinar este volumen que existe de Hb circulante en la sangre es fácil y sencillo de sacar ya que a la hora de meterlo al espectrofotómetro prácticamente nos dice todo solo hay que sacar el resultado haciendo la operación básica que ya nombramos anteriormente.

Los exámenes de laboratorio pueden realizarse por muchas razones, como investigación rutinaria de salud o sospecha de enfermedad o de toxicidad. También pueden ser utilizados para determinar si la efectividad de un medicamento mejora o empeora. Los exámenes pueden medir el éxito o fracaso de un tratamiento. Pueden ser solicitados por razones médicas o legales. Las siguientes son posibles razones por las que este examen puede realizarse:

·                        Acidosis láctica

·                        Anemia de células falciformes

·                        Anemia por deficiencia de hierro

·                        Embolia grasa

Conclusiones:

Existen varios factores para determinar cuándo y con qué frecuencia se pueden realizar los exámenes. Su duración puede depender de los resultados o terminación de otros exámenes, procedimientos o tratamientos. Los exámenes pueden ser realizados inmediatamente en una emergencia o pueden ser demorados conforme una condición es tratada o monitoreada. Se puede sugerir un examen o llegar a ser necesario cuando aparecen ciertos signos o síntomas.

Debido a cambios de las funciones naturales del organismo durante el día, los exámenes pueden ser realizados en una determinada hora. Si usted se ha preparado para este examen con cambios en la ingesta de comida o líquidos, los exámenes pueden ser realizados de acuerdo con estos cambios. Los intervalos para la realización de los exámenes pueden basarse en el aumento o disminución de los niveles de medicamentos, drogas u otras sustancias en el organismo.

La edad o el género de las personas pueden influir en la fecha y la frecuencia con que se requiere un examen. Las condiciones crónicas o progresivas pueden necesitar un monitoreo continuo mediante exámenes. Ciertos exámenes pueden ser repetidos para obtener una serie de resultados o para confirmar o refutar resultados. Las veces que deban realizarse los exámenes y su frecuencia varían dependiendo si se llevan a cabo por razones profesionales o legales.